فرشيد نوربخش
گروهی از منابع نیتروژنی در ساختار پیچیده مواد آلی خاک تثبیت میشوند و ترکیبات سخت تجزیه پذیر را تشکیل میدهند. اکسیداسیون مواد آلی اولین مرحله تجزیه میباشد که توسط آنزیمهای اکسیداتیو ترشح شده از جمعیتهای متنوع میکروبی خاک انجام میشود. در ادامه، فرآیندهای بیوشیمیایی دیگری مثل فعالیت پروتئولیتیک مسئول تجزیه بیشتر مواد پروتئینی به نیتروژن قابل دسترس برای گیاهان و میکروارگانیسمها میباشند. 30 تا 50 % مواد آلی خاک حاوی پروتئین است که توسط آنزیمهای پروتئاز به آمینواسیدها و پپتیدهای کوچک شکسته میشود. در بخش اول این مطالعه اثر تنظیم کنندگی آمینواسیدها بر فعالیت پروتئاز متأثر از تاریخچه مدیریت خاک (جنگل تراشی) بررسی شد. دو آمینواسید آرجینین و هیستدین در غلظتهای µmol g-1 50 و0 با نمونه خاکها مخلوط و به مدت 40 روز انکوبه شدند. تخریب جنگل طبیعی، فعالیت پروتئاز در نمونه های شاهد و تیمار شده با آمینواسیدها را در هر دو منطقه به میزان %80 – 50 کاهش داد. هرچند تیمار آمینواسیدها بر فعالیت پروتئاز اثر القایی داشت و پاسخ پروتئاز دارای سه فاز سکون، افزایشی و کاهشی در انتهای دوره انکوباسیون بود. علاوهبر پروتئازها، مجموعه فعالیت میکروبی (با اندازهگیری هیدرولیز فلورسین دی استات به عنوات شاخصی از کل فعالیت میکروبی) نیز نسبت به افزودن آمینواسیدها افزایش داشته است. در بخش دوم این مطالعه برای بررسی ویژگیهای خاکی و شرایط اقلیمی (رطوبت خاک و دما) بر فعالیت آنزیمهای هیدرولیزکننده نیتروژن، توزیع و غلظت آمینواسیدهای آزاد در خاک، از پنج منطقه در یک ردیف خاکی واقع در غرب استان اصفهان در سه ماه از سال نمونهبرداری انجام شد. سایتهای نمونهبرداری تأثیر قابل توجهی (001/0 < P) بر فعالیت آنزیمهای هیدرولیز کننده نیتروژن داشتند. همه آنزیمهای هیدرولیز کننده نیتروژن شدیداً به تغییر رطوبت خاک حساس بوده و نسبت به افزایش رطوبت پاسخ مثبت نشان دادند. سایتهای نمونهبرداری شدیداً بر غلظت آمینواسیدها (001/0 < P) تأثیر گذار بودند. اما ماههای نمونهبرداری اثر (05/0 < P) ضعیفتری داشت. آمینواسیدها در سایتهای دانشگاه و تندران با کمترین میزان بارش و بیشترین میانگین دمای سالانه، بیشترین غلظت را داشتند. علاوهبراین، در ماه پر بارش (ماه می) آمینواسیدها کمترین غلظت را داشتند. این مطالعه نشان داد که در اقلیمهای خشک دینامیک نیتروژن شدیداً به الگوی رطوبت خاک وابسته است. اندازهگیری آمینواسیدها در سوسپانسیون خاک به دلیل ناهمگونی خاک بیانگر جریان و توزیع آمینواسیدها نیست، در بخش سوم از تکنیک آمینوگرافی برای تصویر سازی و تعیین توزیع مکانی آمینواسیدها در ریزوسفر دست نخورده ذرت (Zea Mays L.) استفاده شد. در این روش، غشاهای نیتروسلوزی اشباع شده با ترکیب ارتو-فتالدهاید، بتا مرکاپتوانانول (OPAME) بر سطح خاک-ریشه قرار داده شد. بعد از واکنش ترکیب OPAME با آمینواسیدها و تولید ترکیب فلورسنس از غشاها عکسبرداری زمانی شد. بیشترین غلظت آمینواسیدها در نزدیکی سطح ریشه و نوک ریشهها مشاهده شد. آمینواسیدها در فاصله mm 1 از سطح ریشه به سمت خاک توزیع شدندکه با فاصله گرفتن از ریشه غلظت کاهش یافت. تکنیک آمینوگرافی امکان بررسی توزیع غلظت آمینواسیدها را در سطح خاک-ریشه فرآهم میکند. در محیط پیچیده و ناهمگون خاک عوامل متعددی بر دینامیک نیتروژن آلی از جمله آمینواسیدها و آنزیمهای هیدرولیزکننده نیتروژن تأثیر گذارند. بنابراین مطالعات بیشتری در زمینه دینامیک نیتروژن در خاک دست نخورده مورد نیاز است. در بخش چهارم این رساله به اهمیت فعالیت آنزیمهای اکسیداتیو در خاک پرداخته شده است. اندازهگیری فعالیت اکسیداتیو در خاک، به دلیل ماهیت واکنش رادیکالهای آزاد، غیر اختصاصی بودن آن و اثر ذرات خاک بر واکنش آنزیم-سوبسترا با چالش رو به رو است. در این فصل از روشی جدید برای اندازهگیری فعالیت آنزیمهای فنول اکسیداز و پراکسیداز بر پایه ترکیب بدون رنگ و غیر فلورسانس Amplex Red® که بعد از اکسیداسیون به ترکیب فلورسنس Resorufin تبدیل میشود، استفاده شده است. اندازهگیری فعالیتهای اکسیداتیو به روش میکروپلیت نشان داد فعالیت آنزیمهای فنل اکسیداز و پراکسیداز برازش خوبی با مدل میکائیلیس – منتن داشته و پارامترهای سینتیکی محاسبه شده به مدیریت اراضی اعمال شده حساس هستند. یکی از مزایای این روش نسبت به روش های رنگ سنجی، استاندارد کردن این روش با ترکیب Resorufin اس

