رفتن به محتوای اصلی
x
ارتباط فعالیت پروتئاز و آمینواسیدهای خاك و توزیع مكانی اكسیدازها در خاك
تاریخ دفاع
استاد

فرشيد نوربخش

دانشکده
مهندسی كشاورزی

گروهی از منابع نیتروژنی در ساختار پیچیده مواد آلی خاک تثبیت می­شوند و ترکیبات سخت تجزیه پذیر را تشکیل می­دهند. اکسیداسیون مواد آلی اولین مرحله تجزیه می­باشد که توسط آنزیم­های اکسیداتیو ترشح شده از جمعیت­های متنوع میکروبی خاک انجام ­می­شود. در ادامه، فرآیندهای بیوشیمیایی دیگری مثل فعالیت پروتئولیتیک مسئول تجزیه بیشتر مواد پروتئینی به نیتروژن قابل دسترس برای گیاهان و میکروارگانیسم­ها می­باشند. 30 تا 50 % مواد آلی خاک حاوی پروتئین­ است که توسط آنزیم­های پروتئاز به آمینواسیدها و پپتیدهای کوچک شکسته می­شود. در بخش اول این مطالعه اثر تنظیم کنندگی آمینواسیدها بر فعالیت پروتئاز متأثر از تاریخچه مدیریت خاک (جنگل تراشی) بررسی شد. دو آمینواسید آرجینین و هیستدین در غلظت­های µmol g-1 50 و0 با نمونه خاک­ها مخلوط و به مدت 40 روز انکوبه شدند. تخریب جنگل طبیعی، فعالیت پروتئاز در نمونه های شاهد و تیمار شده با آمینواسیدها را در هر دو منطقه به میزان %80 – 50 کاهش داد. هرچند تیمار آمینواسیدها بر فعالیت پروتئاز اثر القایی داشت و پاسخ پروتئاز دارای سه فاز سکون، افزایشی و کاهشی در انتهای دوره انکوباسیون بود. علاوه­بر پروتئازها، مجموعه فعالیت میکروبی (با اندازه­گیری هیدرولیز فلورسین دی استات به عنوات شاخصی از کل فعالیت میکروبی) نیز نسبت به افزودن آمینواسیدها افزایش داشته است. در بخش دوم این مطالعه برای بررسی ویژگی­های خاکی و شرایط اقلیمی (رطوبت خاک و دما) بر فعالیت آنزیم­های هیدرولیزکننده نیتروژن، توزیع و غلظت آمینواسیدهای آزاد در خاک، از پنج منطقه در یک ردیف خاکی واقع در غرب استان اصفهان در سه ماه از سال نمونه­برداری انجام شد. سایت­های نمونه­برداری تأثیر قابل توجهی (001/0 < P) بر فعالیت آنزیم­های هیدرولیز کننده نیتروژن داشتند. همه آنزیم­های هیدرولیز کننده نیتروژن شدیداً به تغییر رطوبت خاک حساس بوده و نسبت به افزایش رطوبت پاسخ مثبت نشان دادند. سایت­های نمونه­برداری شدیداً بر غلظت آمینواسیدها (001/0 < P)   تأثیر گذار بودند. اما ماه­های نمونه­برداری اثر (05/0 < P) ضعیف­تری داشت. آمینواسیدها در سایت­های دانشگاه و تندران با کمترین میزان بارش و بیشترین میانگین دمای سالانه، بیشترین غلظت را داشتند. علاوه­براین، در ماه پر بارش (ماه می) آمینواسیدها کمترین غلظت را داشتند. این مطالعه نشان داد که در اقلیم­های خشک دینامیک نیتروژن شدیداً به الگوی رطوبت خاک وابسته است. اندازه­گیری آمینواسیدها در سوسپانسیون خاک به دلیل ناهمگونی خاک بیانگر جریان و توزیع آمینواسیدها نیست، در بخش سوم از تکنیک آمینوگرافی برای تصویر سازی و تعیین توزیع مکانی آمینواسیدها در ریزوسفر دست نخورده ذرت (Zea Mays L.) استفاده شد. در این روش، غشاهای نیتروسلوزی اشباع شده با ترکیب ارتو-فتالدهاید، بتا مرکاپتوانانول (OPAME) بر سطح خاک-ریشه قرار داده شد. بعد از واکنش ترکیب OPAME با آمینواسیدها و تولید ترکیب فلورسنس از غشاها عکس­برداری زمانی شد. بیشترین غلظت آمینواسیدها در نزدیکی سطح ریشه و نوک ریشه­ها مشاهده شد. آمینواسیدها در فاصله mm 1 از سطح ریشه به سمت خاک توزیع شدندکه با فاصله گرفتن از ریشه غلظت کاهش یافت. تکنیک آمینوگرافی امکان بررسی توزیع غلظت آمینواسیدها را در سطح خاک-ریشه فرآهم می­کند. در محیط پیچیده و ناهمگون خاک عوامل متعددی بر دینامیک نیتروژن آلی از جمله آمینواسیدها و آنزیم­های هیدرولیزکننده نیتروژن تأثیر گذارند. بنابراین مطالعات بیشتری در زمینه دینامیک نیتروژن در خاک­ دست نخورده مورد نیاز است. در بخش چهارم این رساله به اهمیت فعالیت آنزیم­های اکسیداتیو در خاک پرداخته شده است. اندازه­گیری فعالیت اکسیداتیو در خاک، به دلیل ماهیت واکنش رادیکال­های آزاد، غیر اختصاصی بودن آن و اثر ذرات خاک بر واکنش آنزیم-سوبسترا با چالش رو به رو است. در این فصل از روشی جدید برای اندازه­گیری فعالیت آنزیم­های فنول اکسیداز و پراکسیداز بر پایه ترکیب بدون رنگ و غیر فلورسانس Amplex Red® که بعد از اکسیداسیون به ترکیب فلورسنس Resorufin تبدیل می­شود، استفاده شده است. اندازه­گیری فعالیت­های اکسیداتیو به روش میکروپلیت نشان داد فعالیت آنزیم­های فنل اکسیداز و پراکسیداز برازش خوبی با مدل میکائیلیس – منتن داشته و پارامترهای سینتیکی محاسبه شده به مدیریت اراضی اعمال شده حساس هستند. یکی از مزایای این روش نسبت به روش های رنگ سنجی، استاندارد کردن این روش با ترکیب Resorufin اس

تحت نظارت وف ایرانی