شناسایی زود هنگام سرطان نه تنها امری حائز اهمیت در ارتباط با تشخیص بیمار می باشد، بلکه در ارزیابی روند بیماری و شیوه های درمان نیز می تواند نقش بسزایی داشته باشد. سلول های توموری گردشی یک زیست شناساگر بسیار مهم به شمار می روند که از تومور اولیه جدا شده و در جریان خون محیطی بیمار گردش می کنند. به دام انداختن این سلول ها، شمارش و ارزیابی آن ها می تواند در تشخیص بیماری و فنوتیپ سرطان مربوطه کمک نماید. در این میان ویروس های انکلوتیک با تکثیر انتخابی در سلول های توموری به عنوان یک ابزاری برای تمایز سلول های خونی از سلول هایی با فعالیت تلومرازی بالا به حساب می آیند. ایده ی اصلی این تحقیق بر به دام انداختن سلول های توموری توسط تمایزشان در فعالیت تلومرازی به وسیله ی ویروس انکلوتیک مهندسی شده ی آدنوویروس و بیان پپتید اسپای تگ بر روی سطح این سلول ها می باشد که بتوان از طریق پروتین اسپای کچر به دام انداخته شده بر سطح میکرودانه، یک پیوند کوالانت میان پپتید سطحی بیان شده بر سطح سلول و پروتین چسبیده بر سطح میکرودانه ایجاد نمود و توسط بیان پروتین ژن فلئورسنت آن را مشاهده و شناسایی نمود.
بدین منظور ابتدا سازه ای ساخته می شود که در آن ژن پپتید اسپای تگ متصل به ناحیه ی Fc آنتی بادی در کنار ژن پروتین فلئورسنت قرار می گیرد. سپس ویروس آدنو برای تکثیر انتخابی در سلول های توموری در ناحیه ی E3 طی فرآیند بازسازی همگون مهندسی شده تا ژن مورد نظر ما را بیان کند. همچنین ناحیه ی E1 شامل پروموتر hTERT بوده که تکثیر آن را تنها در سلول های توموری با فعالیت تلومرازی ممکن می کند. میکرودانه های پوشیده از پروتین اسپا کچر که توانایی به دام انداختن سلولهای متصل به بستر را دارد طراحی و ساخته شده تا پس از همجواری سلول های توموری که در حال بیان پپتید اسپای تگ بر روی سطح خود هستند، به اسپای کچر متصل شده و سلول ها بر روی میکرودانه ایزوله گردند.
ویروس تهیه شده دارای تکثیر انتخابی در سلول هایی با فعالیت تلومرازی بالا بوده، بیان اسپای تگ بر روی سطح آن نشان داده شده و از طریق بیان ژن فلئورسنت در سلول ها، قابل مشاهده بوده اند. علاوه برآن میکرودانه های آگاروزی اصلاح سطحی شده و با استفاده از پیوند الکترواستاتیک میان یون نیکل پوشیده بر سطح و پروتین های اسپای کچر امکان برقراری پیوند کوالانت میان پروتین اسپای کچر و پپتید اسپای تگ فراهم گردید. همچنین ایزولاسیون سلول هایی با فعالیت تلومرازی بر روی میکرودانه انجام پذیرفت.
کلمات کلیدی: سلول های توموری گردشی، ویروس های انکلوتیک، آدنوویروس، اسپای تگ، اسپای کچر، میکرودانه مغناطیسی، آگاروز